破骨细胞诱导分化机制

破骨细胞的特性与功能

破骨细胞是一种起源于造血干细胞的独特多核细胞，专门负责骨吸收过程。它们的分化和功能受到RANKL/RANK/OPG信号通路的调控，这一信号通路正是调节破骨细胞与成骨细胞活性平衡的核心枢纽，确保骨骼的稳态。

RANKL/RANK/OPG信号通路的作用

在破骨细胞的诱导分化过程中，核因子κB受体活化因子配体（RANKL）被认为是促进破骨细胞最重要的分化与成熟因子。M-CSF能够诱导RANK在破骨细胞前体的细胞膜上表达，使得RANK阳性的破骨前体细胞与RANKL结合，从而引发破骨细胞的分化。

破骨细胞的培养方法

骨髓单核细胞诱导法

进行破骨细胞的诱导实验时，首先需选用8-12周龄的雄性C57BL/6J小鼠，并使用CO2吸入法处理，随后进行消毒。此过程要求确保无菌操作，避免污染。

接下来，将小鼠的后肢完整取下，剔除多余的皮肤和肌肉后，将骨头浸泡在含有抗生素的PBS溶液中。利用注射器向骨头两端注入α-MEM，以冲洗出骨髓细胞，反复洗涤直到骨髓腔内不再有明显的红色残留。

经过离心后，加入红细胞裂解缓冲液处理以去除红细胞，随后使用含有M-CSF的培养基重悬细胞，并转移至培养皿中继续培养。细胞培养周期为2-3天，待细胞贴壁达到80%-90%后，进行后续诱导，并定期更换培养基。最终，通过TRAP染色识别破骨细胞。

RAW264.7细胞系诱导法

该细胞系的培养采用含10% FBS的DMEM进行，待细胞汇合度达到80%-90%后，可进行传代。随后，将RAW264.7细胞制成悬液以接种于24孔板中，并在接种后12小时加入RANKL以促进破骨细胞分化。

此方法要求定期更换培养基并补加相应的RANKL浓度，以确保细胞的健康生长与分化进程。通常在分化培养4天后，将会观察到明显的多核破骨细胞的产生，并可通过TRAP染色进行鉴定。

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